不含硫酸的TMB终止液
1、应用:ELISA。使用方法:ELISA显色终止步骤包括: 显色阶段,每孔加入TMB显色液100μL,孵育后溶液渐变蓝。 终止阶段,每孔加入TMB显色终止液(450nm)各100μL,溶液转变为黄色。 检测阶段,使用酶标仪检测OD450或OD450/630。
2、在ELISA实验中,以TMB(四甲基联苯胺)作为底物,其反应过程如下:首先,将TMB与过氧化氢脲溶液混合,HRP(过氧化氢酶)在此环境下发挥作用,催化反应生成蓝色的阳离子根。这个过程中,酶的催化活性至关重要。然而,当加入终止液时,情况发生了变化。
3、酶联物,蓝色液体,主要成分为HRP标记羊抗人IgG抗体,含防腐剂,规格为6/12ml。20倍浓缩洗涤液,无色液体,主要成分为磷酸盐缓冲液和吐温-20,规格为15/50ml,使用前需按照1:19比例稀释。底物液TMB,无色液体,主要成分为TMB,规格为6/12ml。
4、包被:将抗体稀释在碳酸盐缓冲液(1~10μg/ml)中,每孔0.1ml,4℃过夜,次日洗涤。加样:待测样本加入反应孔,37℃孵育1小时,洗涤后加酶标抗体。酶标抗体孵育后,加TMB底物显色,再用硫酸终止反应,结果根据颜色深浅判断。
5、题主是否想询问“什么底物加终止液后颜色变黄”?酶底物。人Calreticulin定量EIA试剂加入酶标抗体,形成免疫复合物连接在板上,加入酶底物TMB,会出现蓝色,加终止液,颜色变黄,在450nm处测OD值,Calreticulin浓度与OD值成正比。